上传时间: 2014-08-12
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第三~五节 细胞融合技术?干细胞工程?克隆技术
动物细胞融合与单克隆抗体
1.植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较
细胞膜的流动性、细胞的全能性
细胞膜的流动性
纤维素酶和果胶酶
胰蛋白酶或胶原蛋白酶
物理法:离心、电激、振动;化学法:聚乙二醇等试剂诱导
除物理法和化学法外还可以用灭活的病毒诱导
杂种植株
杂交细胞
克服了远缘杂交的不亲和性,获得杂种植株
突破了有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能
2.单克隆抗体的制备
(1)制备过程:
注射特定抗原
的免疫小鼠
骨髓瘤
细胞
B淋巴细胞
杂交细胞
专一抗体
检验阳性
专一抗体
检验阳性
单克隆抗体
(2)关键环节:
①取相应B淋巴细胞前必须先注射相应抗原,否则不能获得单克隆抗体。
②细胞融合后需经二次筛选:
第一次:在特定的选择性培养基上,未融合的亲本细胞(B淋巴细胞和骨髓瘤细胞)和融合的具有同种核的细胞(BB融合细胞、瘤瘤融合细胞)都会死亡,只有杂交瘤细胞才能生长。其特点是既能迅速大量繁殖,又能产生单一的特异性抗体。
第二次:经选择培养的杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞(很多种杂交瘤细胞),需经克隆化培养和抗体检测,经筛选后才可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。
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