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第四次实验-质粒转化
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上传时间: 2014-08-24
上传者: admin
星级: 一星级
文件大小: 152KB
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基因工程技术
(Genetic engineering)
第四次实验 感受态细菌的制备及转化实验
将重组DNA导入受体细胞的过程中叫做转化或转染。
细菌细胞能摄取外来DNA的生理状态称为感受态。
基本原理
1. 然界的转化：
2.感受态形成假说：
局部原生质体假说：局部的细胞壁被破坏。
酶-受体假说：细胞壁是完整的，但在壁上产生了一些酶的位点，可以把外来DNA转入胞内。
感受态细菌的制备
3. 外来DNA进入细菌内部的过程
具体过程：a.吸附：dsDNA吸附在细菌表面；b.转入：一条ssDNA进入细胞并被蛋白质保护起来，另一条降解；c.自稳：ssDNA?dsDNA；d.复制表达
*在革兰氏阴性菌中，产生感受态因子，并将dsDNA吸附到胞壁上；在革兰式阳性菌中，因没有分离到感受态因子，DNA以双链进入。
能自主复制；
具有两个以上的遗传标记基因，便于重组体的筛选和鉴定；
有克隆位点（外源DNA插入点），常具有多个单一酶切位点，称为多克隆位点；
分子量小，以容纳较大的外源DNA。
载体的选择标准:
4. 受体菌的改造与选择：
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